| ZHU Yanbing,GAO He,LI Hebin,NI Hui,JIANG Zedong,LI Lijun,XIAO Anfeng.Overexpression and characterization of a thermostable β-agarase producing neoagarotetraose from a marine isolate Microbulbifer sp. AG1[J].Acta Oceanologica Sinica,2019,38(2):96-106 |
| 产新琼四糖的海洋微泡菌属AG1热稳定性β-琼胶酶的过量表达与鉴定 |
| Overexpression and characterization of a thermostable β-agarase producing neoagarotetraose from a marine isolate Microbulbifer sp. AG1 |
| 投稿时间：2017-01-14 |
| DOI：10.1007/s13131-019-1349-y |
| 中文关键词: 热稳定 β-琼胶酶 新琼四糖 微泡菌属 |
| 英文关键词:thermostable β-agarase neoagarotetraose Microbulbifer sp. |
| 基金项目:The Natural Science Foundation of Fujian Province of China under contract No. 2016J01162; the Program for New Century Excellent Talents in Fujian Province University, China under contract No. B15139. |
| 作者 | 单位 | E-mail | | 朱艳冰 | 集美大学食品与生物工程学院, 厦门 361021
福建省食品微生物与酶工程重点实验室, 厦门 361021
厦门市食品与生物工程技术研究中心, 厦门 361021
厦门南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室, 厦门 361021 | | | 高贺 | 集美大学食品与生物工程学院, 厦门 361021 | | | 李鹤宾 | 厦门医学院药学系, 厦门 361023 | | | 倪辉 | 集美大学食品与生物工程学院, 厦门 361021
福建省食品微生物与酶工程重点实验室, 厦门 361021
厦门市食品与生物工程技术研究中心, 厦门 361021
厦门南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室, 厦门 361021 | | | 姜泽东 | 集美大学食品与生物工程学院, 厦门 361021
福建省食品微生物与酶工程重点实验室, 厦门 361021
厦门市食品与生物工程技术研究中心, 厦门 361021
厦门南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室, 厦门 361021 | | | 李利君 | 集美大学食品与生物工程学院, 厦门 361021
福建省食品微生物与酶工程重点实验室, 厦门 361021
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厦门南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室, 厦门 361021 | | | 肖安风 | 集美大学食品与生物工程学院, 厦门 361021
福建省食品微生物与酶工程重点实验室, 厦门 361021
厦门市食品与生物工程技术研究中心, 厦门 361021
厦门南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室, 厦门 361021 | xxaaffeng@jmu.edu.cn |
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| 中文摘要: |
| 从微泡菌属AG1（Microbulbifer sp. AG1）克隆得到1302 bp大小的琼胶酶基因，该基因编码产物为一个成熟蛋白（413个氨基酸残基）外加一个信号肽（20个残基）。将不含信号肽片段的琼胶酶在E. coli BL21 （DE3）中进行了异源表达和纯化。使用琼脂糖作为底物，该重组琼胶酶的最适反应温度和pH分别为60℃和7.5。该重组酶表现出优良的热稳定性，在50℃和60℃下处理1 h，重组琼胶酶仍能分别保持67%和19%的残余酶活力。除了SDS，重组琼胶酶对于其他测试的抑制剂、去垢剂和尿素变性剂有着较好的抗性。利用薄层色谱和以对硝基苯-α/β-D-吡喃半乳糖苷为底物的酶活力分析结果表明，该重组琼胶酶为β型琼胶酶，它水解琼脂糖的主要终产物为新琼四糖，而且不同聚合度的酶解产物具有抗氧化活性。 |
| 英文摘要: |
| An agarase gene containing 1 302 bp was cloned from Microbulbifer sp. AG1. It encoded a mature protein of 413 amino acids plus a 20-residue signal peptide. The recombinant enzyme without the signal peptide was expressed and purified from Escherichia coli BL21 (DE3). When agarose was used as a substrate, the optimal temperature and pH for the enzyme were 60℃ and 7.5, respectively. The recombinant agarase showed excellent thermostability with 67% and 19% of residual activities after incubation at 50℃ and 60℃ for 1 h, respectively. Except SDS, the recombinant agarase had a relatively good resistance against the detected inhibitors, detergents and urea denaturant. Thin layer chromatography analysis and enzyme assay using p-nitrophenyl-α/β-D-galactopyranoside revealed that the recombinant agarase was a β-agarase that degraded agarose into neoagarotetraose as the main end product. The enzymatic hydrolysis products with different degree of polymerization exhibited the antioxidant activities. |
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